潔凈室（區(qū)）沉降菌的監(jiān)測（全面）

一、監(jiān)測依據(jù)
1、《中華人民共和國國家標準（醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法）》GB/T 16294-2010。
2、《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010年修訂）。
二、檢測原理
沉降菌的測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。
三、監(jiān)測要求
1、測試條件
（1）溫度和相對濕度：潔凈室（區(qū)）的溫度和相對濕度應與其生產(chǎn)及工藝要求相適應（無特殊要求時，溫度在18～26℃，相對濕度在45%～65%為宜），同時還應滿足測試儀器的使用范圍。
（2）室內(nèi)壓差、送風量或風速應符合要求。
（3）高效過濾器的泄漏測試應符合要求。
2、測試狀態(tài)
（1）沉降菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）的溫度、濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差必須控制在規(guī)定值內(nèi)。
（2）沉降菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過消毒。
（3）測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。
3、測試時間
（1）靜態(tài)a：單向流潔凈室（區(qū)）在空氣凈化系統(tǒng)正常運行10min后開始，非單向流潔凈室（區(qū)）在空氣凈化系統(tǒng)正常運行30min后開始。
（2）靜態(tài)b：單向流潔凈室（區(qū)）在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場自凈10min后開始；非單向流潔凈室（區(qū)）在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場，自凈20min后開始。
（3）在動態(tài)測試時，則須記錄生產(chǎn)開始的時間以及測試時間。
備注：靜態(tài)a指潔凈室（區(qū)）在空氣凈化系統(tǒng)已經(jīng)安裝完畢且功能完備的情況下，生產(chǎn)工藝設備已安裝、潔凈室（區(qū)）內(nèi)沒有生產(chǎn)人員的狀態(tài)。
靜態(tài)b指潔凈室（區(qū)）在生產(chǎn)操作全部結(jié)束，生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后的狀態(tài)。
四、采樣
1、最少采樣點數(shù)目的確定
根據(jù)潔凈室（區(qū)）面積大小和潔凈級別要求不同確定最少采樣點數(shù)目，按國家標準要求，采樣在滿足最少采樣點數(shù)的同時還應滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)。不同級別的潔凈室（區(qū)）最少采樣點數(shù)可按下表確定：

備注：表中的面積對于單向流潔凈室指的是送風面積，對于非單向流潔凈室指的是房間面積。
最少培養(yǎng)皿數(shù)按下表確定：

2、采樣點的布置
（1）工作區(qū)測試點位置離地0.8～1.5m。
（2）可在關(guān)鍵設備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測試點。
（3）采樣點的布置力求均勻，避免采樣點在某局部區(qū)域過于集中或稀疏。
3、測試步驟
（1）測試前，用75%乙醇棉球或0.1%新潔爾滅溶液擦拭培養(yǎng)皿外表面后，將培養(yǎng)皿放入傳遞窗內(nèi)殺菌至少30min。
（2）將已制備好的培養(yǎng)基平皿面朝上按采樣點布置圖由內(nèi)至外逐個放置，逐一打開皿蓋，把培養(yǎng)皿蓋朝下斜靠在培養(yǎng)皿邊緣，使培養(yǎng)皿表面暴露在空氣中1h以上，但不大于4h，再講培養(yǎng)皿蓋好后倒置。
（3）靜態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為30min以上；動態(tài)測試時，單個沉降碟的暴露時間可以少于4h，同一位置可使用多個沉降碟連續(xù)進行監(jiān)測，并積累計數(shù)，直至監(jiān)測時間累計達到4h。
采樣注意事項：
（1）測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。
（2）靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。
（3）對于單向流潔凈室（區(qū)）或送風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區(qū)），采樣口向上。
（4）布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口。
（5）采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側(cè)，并盡量少走動。
（6）應采取一切措施防止采樣過程的污染和其它可能對樣本的污染。
五、培養(yǎng)
（1）全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，注意觀察菌落生長情況。
（2）采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2天；采用沙氏培養(yǎng)基配制的培養(yǎng)基經(jīng)采樣后，在20～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于5天。
（3）每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。
六、菌落計數(shù)
（1）用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查有無遺漏。
（2）若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)，不能分辨時，以1個菌落計數(shù)。
七、計算結(jié)果
用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)之和，每個檢測點的沉降菌平均菌落數(shù)用下式計算：

式中，為平均菌落數(shù)
    M1為1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)
    M2為2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)
    Mn為n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)
    n為培養(yǎng)皿總數(shù)
八、結(jié)果與判定
每個測點的沉降菌平均菌落數(shù)必須低于所選定評定標準中的界限。在靜態(tài)測試時，若某測點的沉降菌平均菌落數(shù)超過評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果均合格才能判為符合。不同級別潔凈室（區(qū)）沉降菌技術(shù)指標見下表所示：

九、記錄
潔凈室（區(qū)）沉降菌的監(jiān)測應填寫記錄，監(jiān)測報告應包含以下內(nèi)容：
（1）測試者的名稱和地址，測試日期。
（2）測試依據(jù)。
（3）被測潔凈室（區(qū)）的平面布置。
（4）有關(guān)測試儀器及其測試方法的描述。
（5）測試結(jié)果，包括所有統(tǒng)計計算資料。